ARTICULO 2

AISLAMIENTO Y CARACTERIZACION DE UNA NUEVA CEPA, Bacillus sp KJ629314, CON UN ALTO POTENCIAL EN LA DEGRADACION AEROBICA DE DIESEL

S. Cisneros-de La Cueva, M.A. Martínez Prado, J.A. Rojas-Contreras, H. Medrano-Roldan, and M.A. Murillo Martínez

Recibido el 2 de de febrero de , 2014; Aceptado el 2 de de abril de , 2014

INTRODUCCIÓN

Remediación de suelos contaminados se ha considerado como un tema ambiental importante y se estudió en todo el mundo. Entre las diferentes técnicas de rehabilitación, la biorremediación se ha demostrado que tiene el enfoque más eficaz para aliviar los problemas ambientales asociados con el suelo contaminado La biorremediación consiste en el uso de microorganismos autóctonos indígenas o introducidas para desintoxicar y degradar los contaminantes ambientales. La mayoría de los hidrocarburos del petróleo puede ser biodegradable por varias cepas microbianas; Sin embargo, cada uno es capaz de descomponer un grupo específico de moléculas

En tales casos, la inoculación de microorganismos que se caracteriza en suelo contaminado con hidrocarburos de petróleo (bioaumentación) es una de las opciones más prometedoras para conseguir su remediación sostenible.

OBJETIVO

Determinar la capacidad de biodegradación aeróbica de Bacillus sp KJ629314, aislado de un suelo contaminado TPH la minería; expuesto a una concentración amplia gama de diesel, como única fuente de carbono y donador de electrones en condiciones aerobias.

MATERIALES Y MÉTODOS

Diesel: suministrado por PEMEX (Mexican Petroleum Corporation)

a)      alcanos (42,7%),

b)      cicloalcanos (33,4%) 

c)      los compuestos aromáticos (23,9%),

Suelo: se recogió y se esteriliza en un horno a 200 ° C durante 48 h

Aislamiento de bacterias: se aislaron a partir de hidrocarburos de petróleo suelo contaminado de un sitio minero en San Dimas Tayoltita, Durango

a)      Método de placa de vertido

b)      Agar-Agar

c)      Alícuota de 0,2 ml de diesel a la superficie interior de las placas de Petri

d)       incubaron a 35ºC durante 72 h

Identificación de Bacterias:

1.      Extracción de ADN: se extrajo de los gránulos resultantes de la centrifugación de 2,0 ml alícuota de cultivos bacterianos mixtos y puros activos, utilizando el método Winston

2.      polimerasa reacción en cadena (PCR): El gen 16S rRNA se amplificó utilizando cebadores ZVN-1 y ZVN-2

        a) Desnaturalización inicial del ADN a 95 ° C  b)  hibridación 65 a 60 ° C   c) extensión a 72 ° C

3.     El análisis filogenético: se analizaron con la versión de software MEGA

Fase experimental:

1.       Experimentos en el microcosmos:

a) matraz 250 ml : 160 g de arena

                             Sal mineral (N: P de 15 : 1)

                              Concentraciones diesel (10.000; 20.000; 30.000; 40.000 y 50000; mg / kg )

                             Inóculo bacteriano fue añadido al microcosmos de 107 células / g de suelo

                               Agua del suelo se ajustó a 70%

                               Incubaron a 30 °

2. Cuantificación Diesel: Se determinó por extracción soxhlet usando 10 g de suelo

3. Monitorización microbiana: se realizó a los 0, 5, 10, 15, 30, 45, y 60 días

RESULTADOS

Hidrocarburos de cadena larga que degradan bacterias: Aislamiento e identificación

Figura 1. Muestra el análisis filogenético de KJ629314 Bacillus sp por BLASTN utilizando la región variable de 16S rRNA y registrada en el Banco de la GEN en el Centro Nacional de Información Biotecnológica (NCBI). La cepa aislada comparte una similitud de genes 16S rRNA de 100% que corresponde a varias cepas del género Bacillus: Bacillus thuringiensis, Bacillus cereus, y Bacillus amyloliquefaciens.

Figura 2. Muestra la observación microscópica de la prueba de tinción de Gram para confirmar la morfología de las bacterias, son bacilos Gram positivos.

CONCLUSIONES

Bacillus sp, las bacterias aisladas de suelo extracción contaminada con TPH mostraron que este cultivo puro fue capaz de crecer en diesel como fuente de carbono y energía f (donador de electrones, ED) en condiciones aeróbicas utilizando oxígeno como electrones aceptor (EA).

Biodegradación de KJ629314 Bacillus sp en diesel mostraron que las bajas concentraciones de 10.000 y 20.000 ppm causaron un efecto estimulante positivo en el crecimiento microbiano con una eficiencia superior en la biodegradación de hidrocarburos.

BIBLIOGRAFÍA

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